Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 10(4):19. DOI
Lượt xem: 157 Lượt tải PDF: 5
Hồ Huỳnh Thuỳ Dương
Mục đích. Ngày nay số lượng virus đã trở thành một tiêu chuẩn quan trọng để xử trí với bệnh nhân viêm gan B/C. Kỹ thuật real-time PCR/RT-PCR thường được nhiều phòng thí nghiệm ưa chuộng dùng cho định lựơng HBV/ HCV. Nghiên cứu này nhằm xây dựng một bộ kit tại chỗ đáng tin cậy để định lượng HBV/ HCV với giá thành phải chăng. Phuơng pháp nghiên cứu. Chúng tôi sử dụng kỹ thuật real-time PCR/RT-PCR với mẫu dò TaqMan (TaqMan probe) để định lượng HBV và HCV trong máu bệnh nhân và khảo sát một số điều kiện tối ưu hóa phản ứng. Kết quả Nồng độ MgCl2 tối ưu cho định lượng HBV và HCV là 3,5 mM, nồng độ TaqMan probe tối ưu đối với HBV là 250 nM, đối với HCV là 300 nM. Các chỉ tiêu của phản ứng được xác định bao gồm (1) hệ số tuyến tính của đường chuẩn đối với HBV là 0,989, HCV là 0,996, (2) hệ số biến thiên nội phản ứng đối với HBV là 0,2-0,5, HCV là 0,76-2,05, (3) hệ số biến thiên liên phản ứng đối với HBV là 2,5-10,9, HCV là 2,4-8,81, (4) độ nhạy đối với HBV và HCV là 101 bản sao/ml máu. Kết luận. Khi so sánh kết quả real-time PCR/RT-PCR với kết quả bDNA trên 34 bệnh phẩm dương tính HBV và 32 bệnh phẩm dương tính HCV, chúng tôi thu được hệ số tương quan giữa hai phương pháp đối với HBV là 0,9527, đối với HCV là 0,8369.
Background and aims. Nowadays viral load has became an important criteria for management of hepatitis B/C patients. The realtime PCR/RT-PCR was the technique of choice by majority of laboratories to quantify HBV/ HCV in patient sera. The aim of this study was to create a rialable local kit for HBV/ HCV load with reasonable price. Methods and results. Some factors influencing amplification reactions were determined : Optimal concentration of MgCl2 is 3,5 mM for the two reactions, optimal TaqMan probe concentration is 250 nM for HBV and 300 nM for HCV. We determined some main characteristics of real-time PCR including : (1) The standard curves for HBV and HCV quantitation have a correlation coefficient of 0,989 and 0,996 respectively, (2) The intra-assay variability coefficient is 0,2-0,5 for HBV and 0,76-2,05 for HCV, (3) The inter-assay variability coefficient is 2,5-10,9 and 2,4-8,81 for HBV and HCV respectively (4) The detection limit of the two reactions is 101 copies/ml. Comparison between real-time PCR and bDNA results showed a coefficient of 0,9527 on 34 HBV infected samples, and 0,8369 on 32 HCV infected samples. Conclusion. Our realtime PCR/RT-PCR kit using TaqMan technology gave the result of HBV/ HCV load in good correlation with the bDNA kit available now in the market but with a higher sensitivity and larger dynamic range.
