Nghiên Cứu Y Học
MLPA IN DETECTION OF DELETION MUTATIONS CAUSING DUCHENNE MUSCULAR DYSTROPHY
Bấm tải bài viết
Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh,
14(4):53. DOI
Lượt xem: 167 Lượt tải PDF:
2
Tác giả
Nguyễn Khắc Hân Hoan(1), Quách Thị Hoàng Oanh(1), Phạm Ngọc Khôi(2), Nguyễn Thị Phương Mai(3), Ngô Diễm Ngọc(3), Trần Vân Khánh(4)
Tóm tắt
Đặt vấn đề: Bệnh DMD và BMD là bệnh di truyền thần kinh cơ do đột biến gen DMD. Hơn 65% trường hợp là đột biến mất hoặc lập đoạn gen. Kỹ thuật MLPA gần đây được cho là chẩn đoán mất đoạn gen rất hiệu quả.
Mục tiêu: Đánh giá hiệu quả của kỹ thuật MLPA trong phát hiện đột biến mất đoạn gen DMD.
Phương pháp: 18 mẫu DNA của bệnh nhân nam đã chẩn đoán lâm sàng là bệnh DMD/BMD và đã phát hiện đột biến mất đoạn gen bằng multiplex PCR. Được khảo sát 79 exon trên gen DMD bằng kit Salsa MLPA P034A2 và P035A2, điện di mao quản bằng CEQ 8000 và phân tích tự động bằng phần mềm Gene Marker.
Kết quả: MLPA cho phép xác định chính xác kích thước của đoạn DNA bị đột biến,khảo sát được hết 79 exon của gen DMD, kỹ thuật phân tích dễ dàng, trực quan, nhanh và có độ lặp lại cao. Mọi exon của gen DMD bị mất đều được khẳng định trên biểu đồ. Bộ 3 multiplex PCR chỉ khảo sát được 25 exon và có những exon không được phát hiện.
Kết luận: Kỹ thuật MLPA giúp phát hiện nhanh chóng, toàn diện các đột biến mất đoạn gen DMD và ưu điểm vượt trội so với kỹ thuật multiplex PCR.
Abstract
Background: DMD and BMD are genetic disorders caused by DMD mutations. More than 65% of cases are deletion or duplication mutation. Recently, MLPA is described as an effective method to dectect these mutations.
Objective: Evaluate the effectiveness of MLPA in detecting DMD gene deletion mutations.Method: 15 DNA samples of male affected with DMD/BMD detected with deletion mutations by multiplex PCR are tested for 79 exons with Salsa MLPA P034A2 và P035A2 kit, capillary electrophoresed with CEQ 8000 and automated analysis with Gene Marker software.
Results: MLPA allows to detect the size of DNA fragment lost, the technique is easy, visual, rapid and reproducible. All 79 deleted exons are present in electropherograms. Set of 3 multiplex PCR only detects 25 exons and some exons cannot be found by this set.
Conclusion: MLPA helps to rapid detection all deletions of DMD gene and is prominent to multiplex PCR.
